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液氮罐細胞冷凍

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  細胞凍存是細胞生存的重要要領之一。使用凍存技能將細胞置于-196~C液氮中低溫生存,可以使細胞臨時離開生長狀態而將其細胞特性生存起來,如許在必要的時間再蘇醒細胞用于實行。并且適度地生存肯定量的細胞,可以防備因正在造就的細胞被污染或其他不測變亂而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。除此之外,還可以使用細胞凍存的情勢來購置、寄贈、互換和運送某些細胞。 細胞凍存時向造就基中參加掩護劑——終濃度5%~15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點低落,加之在遲鈍凍結條件下,細胞內水分透出,淘汰了冰晶形成,從而制止細胞毀傷。尺度冷凍速率開始為-1 到 -2℃/min,當溫度低于-25℃時可加快,到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。

  現在常用的掩護劑為二甲亞砜(DMSO)和甘油,它們對細胞無毒性,分子量小,溶解度大,易穿透細胞。

  實行質料

  儀器:液氮罐、凍存管(塑料螺口專用凍存管或安瓿瓶)、離心管、吸管、離心機等

  試劑:0.25%胰酶、造就基、含掩護劑的造就基(即凍存液)

  附:凍存液配制:造就基參加甘油或DSMO,使其終濃度達5-20%。掩護劑的種類和用量視差別細胞而差別。配好后4℃下生存。

  實行步調

  1.消化細胞,將細胞懸液網絡至離心管中。

  2.1000rpm離心10分鐘,棄上清液。

  3.沉淀加含掩護液的造就,計數,調解至5106/ml左右。

  4.將懸液分至凍存管中,每管1ml。

  5.將凍存管口封嚴。如用安瓿瓶則火焰封口,封口肯定要嚴,不然蘇醒時易出現爆裂。

  6.貼上標簽,寫明細胞種類,凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細繩。

  7.按下列次序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-30℃ 1小時)→氣態氮(30分鐘)→液氮。

  細致:操縱時應警惕,以免液氮凍傷。液氮定期查抄,隨時增補,絕對不克不及揮發潔凈,一樣通常30立升的液氮能用1~1.5月。


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